如何提高引物扩增的特异性现在合成了几对引物,要把一个基因扩出来,怎么提高特异性?升高PCR的温度了,做了8个温度梯度,跑电泳,最高温没有条带,最低温很多条带,中间的其次,请问是不该降低
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/07/02 03:39:44
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如何提高引物扩增的特异性现在合成了几对引物,要把一个基因扩出来,怎么提高特异性?升高PCR的温度了,做了8个温度梯度,跑电泳,最高温没有条带,最低温很多条带,中间的其次,请问是不该降低
如何提高引物扩增的特异性
现在合成了几对引物,要把一个基因扩出来,怎么提高特异性?升高PCR的温度了,做了8个温度梯度,跑电泳,最高温没有条带,最低温很多条带,中间的其次,请问是不该降低镁离子浓度?该降到多少?
如何提高引物扩增的特异性现在合成了几对引物,要把一个基因扩出来,怎么提高特异性?升高PCR的温度了,做了8个温度梯度,跑电泳,最高温没有条带,最低温很多条带,中间的其次,请问是不该降低
1,镁离子浓度过高会降低pcr扩增特异性,我做过镁离子浓度梯度,最佳的浓度是要摸索的,比如我的实验中,最佳的是2.5mM,因为我的模板是我自己提取的,可能质量不好.
2,你也要考虑引物的设计是否存在问题,用软件分析下引物的特异性好不好.
3,可以考虑用高保真聚合酶,如pfu,特异性极高,错误率低.
pcr的很多因素都要自己摸索,不仅仅是温度.尤其是当模板是自己提取的时候,可能残留有乙醇,EDTA等影响pcr酶活性的物质.(当初扩增一个基因,花了我将近半个多月^_^)
楼上正解,不过补充下,降低温度试了没?有时候PCR条件很恐怖的
如何提高引物扩增的特异性现在合成了几对引物,要把一个基因扩出来,怎么提高特异性?升高PCR的温度了,做了8个温度梯度,跑电泳,最高温没有条带,最低温很多条带,中间的其次,请问是不该降低
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请问PRIMER 设计时的RATING 如果我们用PRIMER 5.0对一对引物中评价其好坏我们进行PCR扩增时,有的时候会出现多条带.会不会是引物自身以及引物间互作引起的,而不仅是由于引物特异性不强引起呀?
如何查基因引物的特异性,就是看我们的引物是不是对这个基因特异的,还是否存在于别的基因上?
mRNA差异显示原理中随机引物是如何生成的,另外10 mer 的随机引物中的10 还有为什么20种随机引物和12种锚定引物就可以扩增出所有的mRNA了,
PCR产物测序问题.我用简并引物扩增未知基因.设计了几对引物.都出现了目的条带.发现其中两对引物的产物长度比较长.因为我最终是要拿到这个未知基因的全长.我想选择最长的目的条带去测