western blot中,封闭液封闭完成后,需要用PBS或PBST洗涤滤膜,然后进行一抗孵育,在一抗孵育完成后为什么要清洗滤膜上的磷酸盐,磷酸盐对后续的加入二抗有什么影响?一抗孵育完成后,我是知道洗
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/07/04 23:39:27
![western blot中,封闭液封闭完成后,需要用PBS或PBST洗涤滤膜,然后进行一抗孵育,在一抗孵育完成后为什么要清洗滤膜上的磷酸盐,磷酸盐对后续的加入二抗有什么影响?一抗孵育完成后,我是知道洗](/uploads/image/z/4348949-5-9.jpg?t=western+blot%E4%B8%AD%2C%E5%B0%81%E9%97%AD%E6%B6%B2%E5%B0%81%E9%97%AD%E5%AE%8C%E6%88%90%E5%90%8E%2C%E9%9C%80%E8%A6%81%E7%94%A8PBS%E6%88%96PBST%E6%B4%97%E6%B6%A4%E6%BB%A4%E8%86%9C%2C%E7%84%B6%E5%90%8E%E8%BF%9B%E8%A1%8C%E4%B8%80%E6%8A%97%E5%AD%B5%E8%82%B2%2C%E5%9C%A8%E4%B8%80%E6%8A%97%E5%AD%B5%E8%82%B2%E5%AE%8C%E6%88%90%E5%90%8E%E4%B8%BA%E4%BB%80%E4%B9%88%E8%A6%81%E6%B8%85%E6%B4%97%E6%BB%A4%E8%86%9C%E4%B8%8A%E7%9A%84%E7%A3%B7%E9%85%B8%E7%9B%90%2C%E7%A3%B7%E9%85%B8%E7%9B%90%E5%AF%B9%E5%90%8E%E7%BB%AD%E7%9A%84%E5%8A%A0%E5%85%A5%E4%BA%8C%E6%8A%97%E6%9C%89%E4%BB%80%E4%B9%88%E5%BD%B1%E5%93%8D%3F%E4%B8%80%E6%8A%97%E5%AD%B5%E8%82%B2%E5%AE%8C%E6%88%90%E5%90%8E%EF%BC%8C%E6%88%91%E6%98%AF%E7%9F%A5%E9%81%93%E6%B4%97)
western blot中,封闭液封闭完成后,需要用PBS或PBST洗涤滤膜,然后进行一抗孵育,在一抗孵育完成后为什么要清洗滤膜上的磷酸盐,磷酸盐对后续的加入二抗有什么影响?一抗孵育完成后,我是知道洗
western blot中,封闭液封闭完成后,需要用PBS或PBST洗涤滤膜,然后进行一抗孵育,在一抗孵育完成后为什么要清洗滤膜上的磷酸盐,磷酸盐对后续的加入二抗有什么影响?
一抗孵育完成后,我是知道洗膜的,可是《分子克隆》上说要清洗掉磷酸盐与叠氮钠,清洗叠氮钠我知道为什么,可是不知道为什么要清洗掉磷酸盐,因为在网上有不少资料在洗膜过程中是不用换掉PBS的(因PBS中含有磷酸盐),可是《分子克隆》上说要在一抗孵育完成后用TBST洗滤膜,
western blot中,封闭液封闭完成后,需要用PBS或PBST洗涤滤膜,然后进行一抗孵育,在一抗孵育完成后为什么要清洗滤膜上的磷酸盐,磷酸盐对后续的加入二抗有什么影响?一抗孵育完成后,我是知道洗
一抗孵育完成后洗膜是为了洗掉未和膜结合的抗体,而不是磷酸盐.只有洗干净非特异性结合在膜上的一抗,加二抗时才不会因非特异结合而呈现很重的背景.至于是使用PBS(T)还是TBS(T),这要具体看你的二抗种类.PBS不适合AP系列,PBS/TBSS适合AP和HRP体系.另外,做磷酸化蛋白的WB,PBS不合适.
一抗孵育完了要用PBST或TBST洗掉未结合抗原的一抗,一抗不洗干净显色以后背景会很重。
就是洗叠氮钠和非特异结合的一抗的,磷酸盐只是缓冲环境,当然有人不喜欢用PBST洗,有人用TBST洗,就是一个磷酸盐缓冲环境和Tris的缓冲环境而已,个人喜好。
有可能你看错了,就一般的理解,是没有必要的,TBST并不是洗磷酸盐。或者二抗是AP标记的才要洗磷酸盐。
HRP标记的二抗,就算是用PBST洗,也是可以的。因为二抗可以用PBS稀释。洗去PBS是没有意义的。
封闭完可直接一抗孵育 一抗完了用PBST洗三次后二抗孵育 离子浓度肯定会对抗体结合有影响啦